Purification and characterization of uricase enzyme produced fromPseudomonas aeruginosa 7

Sahib Ali Mahdi Al-Atraqchi* ,Etab Abdul Ameer Al-Mosawi

*karbala’auniversity , college of medicine

Summary :

uricase enzyme was partially purified from culture filtrate of  P. aeruginosa 7  by  two steps :

Precipitation with ammonium sulfate 70 % saturation and ion exchange chromatography on  DEAE – Cellulose . uricase was purified by 7.2 fold with yield 43.79 % .

Uricase showed optimum pH (8.5 – 9) and pH stability was in the  range of (8 – 9.5) . the  temperature  optimum of uricase enzyme  was 35 C^o .and the thermostable for uricase enzyme to observe  that the enzyme was retain reserved by perfect activity at (25 – 40) C^o and for 20 min.

The kinetic of uricase enzyme that representation by K_m and V_max  was investigation and to be whole estimation by followed by  three  method , the rang value of K_m was reached to 0.0091 mg / ml  . However the  V_max was reached to 6.68 µM / ml . min. , by using  the uric acid as a substrate.

The effective of some metal ion was studied and the result  showed that the NiCl , AgCl₂ and  HgClare inhibiters , inaddition to  that using 1 mM from FeCl₂ cause to lose 88.93 % from enzyme  activity. Whereas NaCl enhance the enzyme activity that reached  to  216.448 % at 1 mMconcentration , Mgcl₂ ,CaCl₂ were consider  enhancer to the enzyme activity at concentration of 5mM and the residue activity was reached to(170.35 and129.62)% respectively .

تنقية و توصيف انزيم اليوريكيز المنتج من بكتريا Pseudomonas aeruginosa 7

صاحب علي مهدي الاطرقجي * , عتاب عبد الامير ابراهيم الموسوي

*جامعة كربلاء , كلية الطب , قسم الكيمياء الحياتية .

الخلاصة :

تم تنقية انزيم اليوريكيز جزئياً من الوسط الزرعي لبكتريا P. aeruginosa بأستخدام خطوتين :

الترسيب بوساطة كبريتات الأمونيوم (70% تشبع ) و التبادل الايوني بأستخدام المبادل الايوني DEAE –Cellulose  إذ تم الحصول على عدد مرات تنقية 7.2 مرة و حصيلة انزيمية 42.8% وبلغ الاس الهيدروجيني الامثل لفعالية الانزيم  (9 , 8.5) وان الانزيم ثابت في مدى أس هيدروجيني بين (9.5 , 8) . وان درجة الحرارة المثلى لفعالية الانزيم تكون هي 35 مْ ويبقى الانزيم محتفظاً بفعاليتهِ كاملةً عند درجة حرارة (40 – 25) مْ ولمدة 20دقيقة .

أظهرت الدراسات الحركية لانزيم اليوريكيز ان العلاقة بين تركيز الركيزة (حامض اليوريك) وسرعة التفاعل تخضعان الى معادلة ميكالس منتن وقدرت الثوابت الحركية المتمثلة بثابت ميكالس K_m والسرعة القصوى V_max للأنزيم وتم تقديرها بأتباع طرائق ثلاث , إذ بلغت معدلات  قيم ثابت ميكالس K_m هو 0.0091 ملغم \ مل , اما السرعة القصوىV_max فقد بلغت 6.68 مايكرومول \ مل . دقيقة , عند استخدام حامض اليوريك كركيزة  .

    دُرس تاثير بعض الايونات الفلزية حيث أوضحت النتائج ان كلوريدات النيكل الزئبق و الفضة من مثبطات الانزيم , كما ان استخدام كلوريد الحديد وبتركيز 1 ملي مولر يٌفقد من الانزيم فعاليتهُ 88.93% .

بينما يُعد كلوريد الصوديوم منشطاً قوياً لفعالية الانزيم اذ بلغت الفعالية المتبقية 216.44% عند استخدامهُ بنسبة 1ملي مولر , كما ويُعد كلوريد المغنسيوم وكلوريد الكالسيوم من المنشطات ايضاً عند استخدامهما بتركيز 5 ملي مولر لتبلغ الفعالية المتبقية (129.62 , 170.35) % .

تحميل البحث