Latest:

تنقية و توصيف انزيم اليوريكيز المنتج من بكتريا Pseudomonas aeruginosa 7

Purification and characterization of uricase enzyme produced fromPseudomonas aeruginosa 7

Sahib Ali Mahdi Al-Atraqchi* ,Etab Abdul Ameer Al-Mosawi

*karbala’auniversity , college of medicine

Summary :

uricase enzyme was partially purified from culture filtrate of  P. aeruginosa 7  by  two steps :

Precipitation with ammonium sulfate 70 % saturation and ion exchange chromatography on  DEAE – Cellulose . uricase was purified by 7.2 fold with yield 43.79 % .

Uricase showed optimum pH (8.5 – 9) and pH stability was in the  range of (8 – 9.5) . the  temperature  optimum of uricase enzyme  was 35 C.and the thermostable for uricase enzyme to observe  that the enzyme was retain reserved by perfect activity at (25 – 40) Co and for 20 min.

The kinetic of uricase enzyme that representation by Km and Vmax  was investigation and to be whole estimation by followed by  three  method , the rang value of Km was reached to 0.0091 mg / ml  . However the  Vmax was reached to 6.68 µM / ml . min. , by using  the uric acid as a substrate.

The effective of some metal ion was studied and the result  showed that the NiCl , AgCland  HgClare inhibiters , inaddition to  that using 1 mM from FeClcause to lose 88.93 % from enzyme  activity. Whereas NaCl enhance the enzyme activity that reached  to  216.448 % at 1 mMconcentration , Mgcl2 ,CaClwere consider  enhancer to the enzyme activity at concentration of 5mM and the residue activity was reached to(170.35 and129.62)% respectively .

تنقية و توصيف انزيم اليوريكيز المنتج من بكتريا Pseudomonas aeruginosa 7

صاحب علي مهدي الاطرقجي * , عتاب عبد الامير ابراهيم الموسوي

*جامعة كربلاء , كلية الطب , قسم الكيمياء الحياتية .

الخلاصة :

تم تنقية انزيم اليوريكيز جزئياً من الوسط الزرعي لبكتريا P. aeruginosa بأستخدام خطوتين :

الترسيب بوساطة كبريتات الأمونيوم (70% تشبع ) و التبادل الايوني بأستخدام المبادل الايوني DEAE –Cellulose  إذ تم الحصول على عدد مرات تنقية 7.2 مرة و حصيلة انزيمية 42.8% وبلغ الاس الهيدروجيني الامثل لفعالية الانزيم  (9 , 8.5) وان الانزيم ثابت في مدى أس هيدروجيني بين (9.5 , 8) . وان درجة الحرارة المثلى لفعالية الانزيم تكون هي 35 مْ ويبقى الانزيم محتفظاً بفعاليتهِ كاملةً عند درجة حرارة (40 – 25) مْ ولمدة 20دقيقة .

أظهرت الدراسات الحركية لانزيم اليوريكيز ان العلاقة بين تركيز الركيزة (حامض اليوريك) وسرعة التفاعل تخضعان الى معادلة ميكالس منتن وقدرت الثوابت الحركية المتمثلة بثابت ميكالس Km والسرعة القصوى Vmax للأنزيم وتم تقديرها بأتباع طرائق ثلاث , إذ بلغت معدلات  قيم ثابت ميكالس Km هو 0.0091 ملغم \ مل , اما السرعة القصوىVmax فقد بلغت 6.68 مايكرومول \ مل . دقيقة , عند استخدام حامض اليوريك كركيزة  .

    دُرس تاثير بعض الايونات الفلزية حيث أوضحت النتائج ان كلوريدات النيكل الزئبق و الفضة من مثبطات الانزيم , كما ان استخدام كلوريد الحديد وبتركيز 1 ملي مولر يٌفقد من الانزيم فعاليتهُ 88.93% .

بينما يُعد كلوريد الصوديوم منشطاً قوياً لفعالية الانزيم اذ بلغت الفعالية المتبقية 216.44% عند استخدامهُ بنسبة 1ملي مولر , كما ويُعد كلوريد المغنسيوم وكلوريد الكالسيوم من المنشطات ايضاً عند استخدامهما بتركيز 5 ملي مولر لتبلغ الفعالية المتبقية (129.62 , 170.35) % .

تحميل البحث