Isolation and characterization of bone marrowmesenchymal stem cellsfrom rat and rabbit; a modified method
RaedHamzah Mohammed; Faculty of Medicine, Karbala University.
Ali MansoorJasim; Faculty of Medicine, Karbala University .
Limes HusamAlmanseekanaa , Faculty of Medicine, Karbala University .
Abstract
Bone marrow MSCs were obtained from New Zealand White rabbits (~3 kg, male) and also from white rat (Ratusratus) by the Guideline for Animal Care and use Committee for Teaching and Research using a modified procedure (1,2) Briefly, after the animals was sacrified with carbon monoxide cabinet, tibias and femurs were excised and the bone marrow was extracted under sterile conditions.The collected marrow was mixed and dispersed with PBS. After that the (MSCs) were separated by density-gradient centrifugation over ficoll. Viability of the separated MSCs was determined via trypan blue staining technique. Then, cells were seeded into ten tissue culture flasks containing complete culture medium suplimented with 10% fetal bovine serum (FBS) and antibiotics, incubated at 370C in a humidified atmosphere with 5% CO2. Once the colonies reached 80–90% confluence, they were ready to be detached with trypsin/EDTA and suspended in medium for continuous culture.
عزل وتوصيف خلايا نخاع العظم ألجذعيه الميزنكيميه من الجرذانوالأرانب .طريقة محورة
*رائد حمزة محمد , كلية الطب , جامعة كربلاء .*لميس حسام المنسي القانع ,كلية الطب ,جامعة كربلاء .*م. علي منصور جاسم ,كلية الطب ,جامعة كربلاء.
الخلاصة
تضمنت الدراسة عزل و تنمية الخلايا الجذعية الميزنكيمية من نقي العظم للارنب الابيض الذكر والذي يزن حوالي 3 كغم والجرذ الابيض المختبريين طبقا لقوانين هيئة العناية بالحيوان واستعماله للأغراض البحثية و التعليمية وذلك باتباع طريقة محورة لهذا الغرض. بأيجاز, بعد قتل الحيوان داخل كابينة غاز أحادي أوكسيد الكاربون تم استئصال عظمي الفخذ وعظمي القصبة وبعدها تم استخراج نقي العظم منها والذي خلط مع محلول الفوسفات الملحي ( (PBS. ثم تم فصل الخلايا الجذعية الميزنكيمية من الخليط بوساطة السنترفيوج مع فارق الكثافة وذلك بأضافة مادة الفيكول. بعد ذلك تم تحديد حيوية الخلايا المفصولة عن طريق تقنية التصبيغ بصبغة التريبان الزرقاء. بعدها تم استنبات الخلايا في عشرة اطباق زرعية نسيجية يحوي كل منها على الوسط الزرعي النسيجي المتكامل مدعما بالمصل البقري والمضادات الحيوية حيث تم الحضن بدرجة 37 مئوية في محيط رطب يحوي 5% غاز ثاني أوكسيد الكاربون. عندما أصبحت درجة اتصال المستعمرات الخلوية 80-90% كانت جاهزة لفصلها بواسطة محلول أنزيم التربسين مع EDTA واستنباتها في الوسط الزرعي الدائمي
تحميل البحث
